The role of single-nucleotide polymorphism rs10824026 of the SYNPO2L gene in the development of atrial fibrillation in a study in the East-Siberian population

Full Text

осложнений, таких как кардиоэмболии, кро- воизлияния, дисфункция левого желудочка [1-3]. В последнее время уделяется большое внимание изучению генетических предикторов, способствую- щих возникновению ФП [4]. В российской и зарубеж- ной литературе представлен ряд исследований, дока- зывающих генетическую обусловленность развития ФП в семьях, в первую очередь изолированной фор- мы [5]. Наибольшее количество генетических пре- дикторов ФП было выявлено после проведения пол- ногеномного исследования (GWAS) [6, 7]. С помощью GWAS была найдена причина странно- го парадокса, наблюдающегося в США на протяже- нии многих лет. Сочетание артериальной гиперто- нии и ожирения (метаболический синдром) в США значительно чаще встречается у афроамериканцев по сравнению с лицами европеоидной расы (белые американцы). Ожирение является важным, потенци- ально значимым фактором риска для развития ФП. При имеющемся ожирении риск развития ФП значи- тельно выше. Однако частота встречаемости ФП бы- ла на 31,7% выше у европеоидной расы по сравнению с афроамериканцами [8]. Разгадка этого парадокса была получена после анализа данных, полученных в исследовании GWAS. Обнаружились существенные различия между европеоидами и афроамериканцами в полиморфизме rs10824026 хромосомы 10q22 гена SYNPO2L (synaptopodin2 like). Полученные данные вызвали большой интерес к указанному полиморфизму и его связи с ФП в различ- ных популяциях [9, 10]. Учитывая то, что до настояще- го времени в российской популяции не проводилось исследований ассоциации полиморфизма rs10824026 хромосомы 10q22 с развитием ФП, мы провели это клиническое исследование. Оно осуществлено на базе Федерального центра сердечно-сосудистой хирургии г. Красноярска с октября 2016 по февраль 2019 г. Материалы и методы Дизайн исследования создан по Национальному стандарту Российской Федерации «Надлежащая кли- ническая практика» (Good Clinical Practice), ГОСТ P 52379-2005. В исследовании используется дизайн «случай-контроль». Основная группа пациентов - больные с известным нарушением ритма сердца по ти- пу ФП (n=106, cредний возраст 57,0±9 лет, мужчины - 50,0%, женщины - 50,0%), группа сформирована с использованием критериев Всемирной организа- ции здравоохранения и Европейского общества кардиологов - European Society of Cardiology - ESC (систематическая запись электрокардиограммы - ЭКГ - абсолютно нерегулярные интервалы R-R и отсутствие отчетливых P-волн при ЭКГ-записи, ре- зультаты эхокардиоскопии - ЭхоКС - структурное ремоделирование также приводит к электрической диссоциации кардиомиоцитов и локальным наруше- ниям проведения, что благоприятствует закрепле- нию и поддержанию аритмии) [11]. Кроме того, ESC в 2010 г. была предложена клиническая классифика- ция EHRA (European Heart Rhythm Association) в зави- симости от выраженности симптомов заболевания, которая в 2014 г. претерпела модификацию, и II класс симптомов разделился на 2 степени тяжести (легкую и умеренную). В результате пациенты, имеющие значительное снижение качества жизни в связи с ФП (2b класс), имеют преимущество при выборе страте- гии контроля ритма на начальном этапе лечения. Это имеет важное значение, так как среди всего числа па- циентов с ФП только менее 50% имеют минимальную симптоматику, и при этом 15-30% испытывают серь- езный дискомфорт и ограничение физической ак- тивности в связи с клиническими проявлениями за- болевания [11]. Контрольная группа (n=105, средний возраст 57,0±9 лет, мужчины - 50,0%, женщины - 50,0%) была отобрана по возрасту и полу из банка ДНК международных исследований MONICA (Multinational MONItoring of trends and determinants in cardiovascular disease) в рамках совместного договора с НИИ терапии и профилактической медицины - фи- лиал ИЦиГ СО РАН, г. Новосибирск. Протокол нашего исследования соответствует стандартам и одобрен локальным этическим комите- том Красноярского государственного медицинского университета (Протокол №8 от 25.12.2018). Помимо прочего было разработано информационное согла- сие на участие в эксперименте, подписанное каждым участником. Критерии включения в основную группу: • лица женского и мужского пола; • место рождения и основное место проживания - Восточно-Сибирский округ; • пациенты с подтвержденным диагнозом ФП со- гласно рекомендациям Российского кардиологиче- ского общества, ЕSC (систематическая запись ЭКГ - нерегулярные интервалы R-R, наличие F-волны и отсутствие отчетливых P-волн при записи ЭКГ, ре- зультаты ЭхоКС описаны выше) [12], Всероссийско- го научного общества аритмологов и Ассоциации сердечно-сосудистых хирургов России (2017 г.); • идиопатическая форма ФП; • согласие пациента на исследование; • способность больного выполнять необходимые процедуры. Также в исследование были включены 3 типа ФП, ос- нованных на классификации ЕSC: 1-й - пароксиз- мальная форма (длительность пароксизмов до 7 сут) - 67,9% больных; 2-й - персистирующая (от 7 сут до 1 года) - 26,6% больных; 3-й - длительно персисти- рующая (от 1 года и более, копирующаяся при помо- щи медикаментозной или электрической кардиовер- сии) - 5,5% больных. Из сопутствующей патологии до- пускалось наличие гипертонической болезни (ГБ) - у 27,5% нет ГБ, у 72,4% выставлен диагноз ГБ. В исследо- вании также учитывались следующие показатели: раз- мер левого предсердия (ЛП) - у 20,1% больных ЛП не расширено и имеет нормальные размеры, у 79,9% - ЛП расширено. С целью исключения вторичной формы ФП всем пациентам проведена коронарная ангиография (КАГ). Критерии исключения: • больные с неуточненным диагнозом; • вторичная форма ФП. Критерии включения в группу контроля: • соответствие по полу и возрасту основной группе; • отсутствие основного заболевания (ФП) и иных на- рушений сердечного ритма; • место рождения и основное место проживания - Восточно-Сибирский округ; • принадлежность к европейской популяции; • способность больного выполнять необходимые процедуры; • согласие пациента на исследование. • отсутствие кровных связей с лицами основной группы пациентов. Генотипирование инсерционного полиморфиз- ма проводили путем cинтеза соответствующего фрагмента ДНК гена SYNPO2L методом полимераз- ной цепной реакции (ПЦР) и анализа длины про- дуктов. Для генотипирования по rs10824026 гена SYNPO2L использовали праймеры: 5’-GGAAATGCAAAGTGTTTCTGTTTC- 3’(F) и 5’-TCAAGTAATCTATCTGCCTGCC- 3’(R). Cмесь для ПЦР объемом 25 мкл включала: Трис-HCI (pH 9,0) 75 мM, (NH4)2SO4 20 мM, Тween-20 0,01%, 2,5 мМ MgCl2, по 0,6 мМ каждого праймера, 0,2 мМ смеси dNTP, 2 мкг ДНК, 1 единицу активности Тaq- ДНК-полимеразы («СибЭнзим», Новосибирск). Амплификацию проводили в следующем темпера- турном режиме: 31 цикл, включающий денатурацию 95°С 30 c, отжиг праймеров 60°С 30 с и элонгацию 72°С 30 с. Рестрикцию проводили c 5 единицами ак- тивности рестриктазы TaqI («СибЭнзим», Новоси- бирск). Детекцию продуктов амплификации и ре- стрикции осуществляли методом электрофореза в 5% полиакриламидном геле c последующим окраши- ванием бромистым этидием (EtBr). Размер продукта амплификации 161 п.н. После проведения рестрикции при генотипе A/A детекти- ровался продукт 161 п.н., при G/G-генотипе - про- дукты 142 и 19 п.н., при гетерозиготном генотипе A/G все перечисленные продукты: 161, 142, 19 п.н. Помимо прочего среди методов исследования ис- пользовались рутинные лабораторные методы (био- химический анализ крови - креатинин, мочевина, клинический анализ крови, а также гормоны щито- видной железы - тиреотропный гормон, трийодти- ронин, тироксин); инструментальные данные (ЭКГ, ЭхоКС); и инвазивные тактики, такие как КАГ, чрес- пищеводная ЭхоКС. Статистический анализ Полученные результаты cтатистически обработа- ны c помощью пакета программ SPSS 22.0., oпреде- лены чaстоты генотипoв и aллелей изучаемого од- нонуклеотидного полиморфизма rs10824026 гена SYNPO2L. Мы использовали критерий c2 для вычис- ления разницы между основной и контрольной группами в распределении полиморфизма A/GSYNPO2L, а также отношение шансов (ОШ) для анализа наличия ассоциации между ФП и наблю- даемыми частотами генотипа в качестве меры рис- ка развития ФП. Cредний возраст пациентов на мо- мент забора образца крови составил 57,0 года (52,5; 61,5) - обе группы, здоровые и больные (ФП), по возрастам статистически значимо не отличались (р=0,711 по критерию Манна-Уитни). В качестве уровня значимости использовали р<0,05. Результаты исследования По полученным данным группа ФП и группа контроля статистически значимо по полу не отли- чаются - р=0,936, хи-квадрат Пирсона (табл. 1). В обеих группах (ФП и контроль) лиц мужского пола на 16±1 человек больше, чем лиц женского пола (см. рисунок). В результате генотипирования полиморфизмов гена SYNPO2L у пациентов обеих групп получены следую- щие результаты (табл. 2): A/A - у 134 (62,6%) человек, A/G - 28 (13,1%), G/G - 38 (17,8%). По генетическим признакам есть cтатистически значимые различия р=0,02 по критерию хи-квадрат Пирсона. Коэффици- ент сопряженности составил при этом 0,26 при р=0,02. Конкретно значимые различия отличаются только в группе G/G по Z-критерию. В результате про- ведения клинико-генетического тестирования обна- ружено, что частота G/G-полиморфизма гена SYNPO2L у пациентов с ФП показывает статистически значимое различие. В связи c этим аллель G можно рассматривать как маркер возникновения ФП. Распределение пола в группе ФП и группе контроля. Sex distribution in the atrial fibrillation group and the control group. | КАРДИОСОМАТИКА | 2019 | ТОМ 10 | № 4 | con-med.ru | | CARDIOSOMATICS | 2019 | VOL. 10 | No 4 | con-med.ru | 37 K S E N I I A Y U . S H I S H K O V A , e t a l . / C A R D I O S O M A T I C S . 2 0 1 9 ; 1 0 ( 4 ) : 3 4 - 3 8 . Обсуждение Однонуклеотидный полиморфизм rs10824026 гена SYNPO2L, согласно данным литературы, ранее был включен в исследование в европейских странах, а также в Китае и Латинской Америке. В своем исследовании The rs3807989 G/A polymorphism in CAV1 is associated with the risk of atrial fibrillation in Chinese Han populations Y. Liu и соавт. вы- явили 6 новых восприимчивых однонуклеотидных полиморфизмов (SNP) - rs3903239 в PRRX1, rs3807989 в CAV1, rs10821415 в C9orf3, rs10824026 в SYNPO2L, rs1152591 в SYNE2 и rs7164883 в HCN4, к ФП у лиц европейского происхождения, тем не ме- нее достоверных ассоциаций rs10824026 с развити- ем ФП не обнаружено [9]. Аналогичный результат по- лучили B. Chalazan и соавт. в исследовании развития риска ФП на латиноамериканской популяции [10]. Тем не менее роль генетических вариаций в разви- тии ФП остается до конца не изученной. В настоящее время твердо установлено, что лица неевропеоидной расы менее склонны к развитию ФП по сравнению с лицами европеоидной. Однако сохраняется ли этот парадокс у пациентов испаноязычного происхожде- ния, пока не ясно. Заключение В результате нашего исследования можно сделать вывод, что генотип GG полиморфизма rs10824026 ге- на SYNPO2L является риском развития ФП, генотип AG обладает протективным эффектом, а генотип AA не оказывает никакого влияния на развитие ФП.

About the authors

Kseniia Yu. Shishkova

Voino-Yasenetsky Krasnoyarsk State Medical University of the Ministry of Health of the Russian Federation

Email: tadtaeva93@mail.ru
Graduate Student Krasnoyarsk, Russia

Svetlana Yu. Nikulina

Voino-Yasenetsky Krasnoyarsk State Medical University of the Ministry of Health of the Russian Federation

D. Sci. (Med.), Prof. Krasnoyarsk, Russia

Vladimir A. Shulman

Voino-Yasenetsky Krasnoyarsk State Medical University of the Ministry of Health of the Russian Federation

D. Sci. (Med.), Prof Krasnoyarsk, Russia

Anna A. Chernova

Voino-Yasenetsky Krasnoyarsk State Medical University of the Ministry of Health of the Russian Federation

Email: anechkachernova@yandex.ru
D. Sci. (Med.) Krasnoyarsk, Russia

Vladimir N. Maksimov

Research Institute of Therapy and Preventive Medicine - Branch of the Institute of Cytology and Genetics, Siberian Branch of the Russian Academy of Sciences

Email: medik11@mail.ru
D. Sci. (Med.), Prof., Research Institute of Therapy and Preventive Medicine - Branch of the Institute of Cytology and Genetics Novosibirsk, Russia

Anna A. Gurazheva

Research Institute of Therapy and Preventive Medicine - Branch of the Institute of Cytology and Genetics, Siberian Branch of the Russian Academy of Sciences

Email: annapalna1@mail.ru
Research Assistant, Scientific Research Institute of Therapy and Preventive Medicine - branch Novosibirsk, Russia

References

Supplementary files