ОЦЕНКА ФИЗИЧЕСКОГО РАЗВИТИЯ ПОТОМСТВА КРЫС, ЛАКТИРУЮЩИМ САМКАМ МАТЕРЯМ КОТОРЫХ ВВОДИЛИ ПРЕПАРАТ ЛАДАСТЕН

Полный текст

Ladasten, experiments on immature rats, physical postnatal development, lactating dams. Психотропный препарат Ладастен (адамантилбром-фениламин) в клинической практике применяется в качестве психотонизирующего и анксиолитического средства. Препарат относится к классу малотоксичных [1] с широким диапазоном терапевтического действия. Экспериментально установленная терапевтическая доза Ладастена 30 мг/кг (1 /300 от ЛД_0) [2], практически соответствует его суточной дозе, используемой в клинической практике. Несмотря на относительную безопасность, у препарата имеются противопоказания назначения женщинам в периоды беременности и грудного вскармливания младенцев. Вместе с тем, в раннее проведенных экспериментальных исследованиях [3], обнаружено отсутствие негативного влияния Ладастена, при внутрижелудочном введении в дозе 30 мг/кг, крысам самкам с 6 по 16 дни беременности на процессы органогенеза, регистрируемые в антенатальный и постнатальный периоды. ЦЕЛЬ РАБОТЫ Учитывая данные сведения, в настоящей работе сочли целесообразным продолжить доклинические исследования и изучить влияние Ладастена при введении лактирующим крысам на развитие потомства от момента их рождения до 2 месячного возраста. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ Эксперименты выполнены на 40 пометах крысят (n=320), полученных от спаривания 4-месячных интактных крыс самок с самцами. После рождения пометы крыс, фиксированные по 8 особей с одинаковой массой и равным количеством самок и самцов, были разделены на 2 равные группы - опытную и контрольную. Опытная группа - пометы крысят, от самок матерей которым с 3-го по 20-й дни лактации (период молочного вскармливания потомства) внутрижелудочно вводили препарат Ладастен в дозе 30 мг/кг, что соответствует высшей суточной дозе, применяемой в клинической практике [2]. Контрольная группа -пометы крысят, матери которых были интактными. Содержание потомств крысят с лактирующими крысами матерями и проведение на них исследований соответствовало правилам лабораторной практики в РФ [6, 9] и методическим рекомендациям, представленных в «Руководстве по проведению доклинических исследований лекарственных средств» [10]. В проводимых наблюдениях у лактирующих крыс матерей отмечали общее состояние, динамику прироста массы тела, их отношение к потомству. После рождения пометы крысят в течение одного месяца находились вместе с крысами матерями, а затем их пересаживали в другие клетки, раздельно по полу (самки и самцы отдельно). У потомств крысят наблюдения проводили от рождения до 2-месячного возраста. При этом у них отмечали общее состояние, подвижность, прирост массы тела, формирование физического развития (отлипания ушной раковины, обрастания шерстным покровом, прорезывания резцов, открытия глаз, опущения яичек Выпуск 3 (63). 2017 133 ЩШгорСз [ЩсмеТКЩ в мошонку у самцов и открытия вагины у самок) и сенсорно-двигательных рефлексов («отрицательный геотаксис», «переворачивание на плоскости и в воздухе», «избегание обрыва», «мышечная сила»). Поведенческую активность у крысят исследовали на 30-й и 60-й дни жизни с использованием теста «открытое поле» [10]. Способность 2-месячных крысят к обучению и запоминанию памятного следа изучали с помощью теста «УРПИ» [10]. Результаты исследований подвергали статистической обработке в программе Microsoft Excel с использованием t-критерия Стьюдента. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ По результатам наблюдений за общим состоянием лактирующих крыс опытной и контрольной групп существенных различий не выявлено. Шерстный покров у них был гладкий, блестящий, лоснящийся, слизистые оболочки чистые и прозрачные. Динамика изменений массы тела была положительной и достоверно не различалась в группах. Отношение лактирующих самок в исследуемых группах к потомствам было доброжелательным, но при этом, в сравнении с контролем, у самок матерей в опытной группе отмечалось увеличение актов обнюхивания и облизывания своих крысят, переноса их в места гнездования, что, вероятно, можно расценивать проявлением у них большей заботы о потомстве. В наблюдениях за общим состоянием потомств крысят также не отмечено существенных межгруппо-вых различий, однако крысята в опытной группе были более подвижными и прирост их массы тела опережал прирост массы контрольных крысят во все периоды измерений (таблица 1). Таблица 1 Динамика прироста масса тела (г) крысят, крысам матерям которых в период лактации вводили препарат Ладастен в дозе 30 мг/кг (внутрижелудочно, 2 недели), (М ± m) *р < 0,05 - различия достоверны относительно исхода (3-й день жизни). Наиболее активный прирост массы тела выявлен у опытных крысят в период их молочного вскармливания и дефинитивного питания. Так, на 7-й день жизни прирост массы тела у крысят в опытной группе составил 71 % (р < 0,05) у самцов и 72 % (р < 0,05) у самок, а в контроле - 58 % (р < 0,05) у самцов и 61 % (р < 0,05) у самок. На 14-й день жизни прирост массы тела у крысят в опытной группе составил 69 % (р < 0,05) у самцов и 72 % (р < 0,05) у самок, а в контроле - 55 % (р < 0,05) у самцов и 56 % (р < 0,05) у самок. Такое же опережение прироста массы тела у опытных крысят относительно контроля сохранялось и в последующие 30-й и 60-й дни наблюдений. Учитывая полученные результаты и то, что наибольший прирост массы тела у опытной группы крысят фиксировался в периоды их молочного вскармливания и дефинитивного питания, предположили, с одной стороны, возможное активирующее влияние Ладастена на центральные моноаминергичес-кие структуры, регулирующие выработку молока у крыс матерей, что не противоречит его механизму действия [5, 7, 8]. С другой стороны, не исключается возможность проникновения Ладастена с молоком матери в организм крысят и наличие его активирующего влияния на механизмы нейроэндокринной регуляции роста и развития крысят. Данное предположение согласуется и с результатами дальнейших наблюдений за потомствами. Так, при оценке физического развития и полового созревания крысят, отсаженных от крыс матерей с учетом половой принадлежности, установлено, что общее состояние и поведение крысят не различалось с таковым в контрольных группах, при этом крысята опытной группы оставались более активными и подвижными. У них также относительно контроля сохранялась активизация прироста массы тела на 30-й и 60-й дни наблюдений (табл. 1). В физическом развитии (табл. 2) у этих крысят в сравнении с контролем отмечено опережение сроков появления первичного волосяного покрова (0,3 дня, р < 0,05), прорезывания резцов (0,3 дня, р < 0,05), открытия глаз (0,3 дня, р < 0,05), поднимания головы и передних лап (0,9 дня, р < 0,05), опоры на задние конечности, подъем всего тела (1,0 дня, р < 0,05) и ползания (1,0 дня, р < 0,05), а в сенсорно-двигательных рефлексах - сокращение сроков формирования безусловных рефлексов в тестах «отрицательный геотаксис» (1,3 дня, р < 0,05) и «переворачивание в свободном падении» (1,1 дня, р < 0,05). В половом развитии (табл. 2) наблюдалось у самцов в опытной группе опережение сроков опущения яичек в мошонку на 2,0 дня (р < 0,05), а у самок - открытия вагины на 3,3 дня (р < 0,05). Таким образом, на основании полученных данных можно заключить, что физическое и половое созревание у потомств крысят, матери которых получали внутрижелудочно препарат Ладастен в дозе 30 мг/кг в период лактации, было завершено к 30-дневному возрасту. Дни измерений Контрольная группа (интактная) Опытная группа (Ладастен, 30 мг/кг) Самцы 3 6,5 ± 0,2 6,40 ± 0,17 7 10,3 ± 0,11* 11,00 ± 0,17* 14 16,00 ± 0,24* 18,60 ± 0,31* 30 43,10 ± 0,97* 48,90 ± 0,67* 60 62,40 ± 0,54* 68,20 ± 0,97* Самки 3 6,3 ± 0,2* 6,20 ± 0,11 7 10,2 ± 0,1* 10,70 ± 0,15* 14 15,90 ± 0,29* 18,50 ± 0,33* 30 41,30 ± 0,77* 46,90 ± 0,59* 60 60,10 ± 0,94* 66,6 ± 0,6* 134 Выпуск 3 (63). 2017 Таблица 2 Физическое развитие крысят, крысам матерям которых в период лактации вводили препарат Ладастен в дозе 30 мг/кг (внутрижелудочно, 2 недели), (М ± m), дни Исследуемые параметры Контрольная группа (интактная) Опытная группа (Ладастен, 30 мг/кг) Отлипание ушной раковины 2,10 ± 0,02 2,00 ± 0,02 Появление первичного волосяного покрова 5,30 ± 0,05 5,10 ± 0,05* Прорезывание резцов 8,90 ± 0,06 8,60 ± 0,08* Открытие глаз и зрачковый рефлекс 14,80 ± 0,09 14,50 ± 0,06* Поднимание головы и передних лап 8,30 ± 0,05 7,50 ± 0,06* Ползание 9,30 ± 0,05 8,40 ± 0,05* Опора на задние конечности, подъем всего тела 10,30 ± 0,05 9,40 ± 0,05* Отрицательный геотаксис 7,40 ± 0,06 6,10 ± 0,04* Переворачивание в свободном падении 19,10 ± 0,04 17,90 ± 0,04* Опускание семенников 26,20 ± 0,06 24,20 ± 0,06* Открытие влагалища 33,10 ± 0,09 29,80 ± 0,06* *р < 0,05; **р < 0,01 - различия достоверны относительно контроля. В серии исследований по оценке поведенческих реакций (тест «открытое поле») у крысят 30-дневного возраста в опытной группе относительно группы контроля прослеживалось достоверное повышение числа горизонтальных передвижений на 13,1 % (р < 0,05), вертикальных стоек без опоры на 46,8 % (р < 0,05), а также актов груминга на 26,3 % (р < 0,05) и дефекаций в 2 раза (р < 0,05), (табл. 3). Таблица 3 Двигательное поведение (тест «открытое поле») крысят 30-дневного возраста, крысам матерям которых в период лактации вводили препарат Ладастен в дозе 30 мг/кг (внутрижелудочно, 2 недели), (М ± m) *р < 0,05 - различия достоверны относительно контроля. Из полученных результатов можно предположить, что активизация поведенческой активности у крысят 30-дневного возраста в опытной группе, вероятно, обусловлена, наличием препарата в организме у этих крысят, что согласуется с ранее высказанным предположением о его проникновении в организм, а также с данными литературы о наличии у препарата кумулирующих свойств [4]. В последующих исследованиях у этих крысят в 60-дневном возрасте по сравнению с контрольной группой не обнаружено каких-либо изменений в поведенческой активности (тест «открытое поле»), что может свидетельствовать об отсутствии данного препарата в организме этих крысят и отсутствии у препарата отдаленных эффектов. В проведенных исследованиях, по влиянию препарата на ЦНС (тест «УРПИ»), у крысят в опытной группе относительно контроля также не было выявлено существенных различий при обучении и воспроизведении памятного следа. Таким образом, из проведенных исследований можно сделать заключение, что препарат Ладастен в дозе 30 мг/кг при интрагастральном введении лактиру-ющим крысам не оказывает повреждающего действия на общее состояние самок и положительно влияет на их отношение к потомству. При этом из результатов наблюдений за потомствами крысят можно также заключить, что препарат Ладастен, вероятно, проникает в организм крысят и оказывает анаболизирующее влияние на массу тела и активизирует физическое развитие. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Об авторах

Т. Д. Денисова

Волгоградский государственный медицинский университет; НИИ фармакологии ВолгГМУ

Любовь Ивановна Бугаева

НИИ фармакологии Волгоградского государственного медицинского университета

Email: li_bugaeva@mail.ru
д. б. н., заместитель директора

Н. М. Щербакова

Волгоградский государственный медицинский университет; НИИ фармакологии ВолгГМУ

Список литературы

Дополнительные файлы